Jump to content

Rekombinant (pozitif) kolonilerin seçimi neye göre yapılır?

mikrobiyolog

mikrobiyolog
in Mikrobiyoloji

Önerilen İletiler

mikrobiyolog

mikrobiyolog

  • Rekombinant koloni, rekombinant plazmit (plazmit+eklenen DNA parçası) taşıyan transformasyona uğramış bir hücredir.
  • Gen klonlama çalışmalarında rekombinant hücrelerin diğerlerinden mutlaka ayrılması gereklidir.
  • Transformasyonda kullanılan DNA aslında ligasyon reaksiyonu sonucu oluşmuş üründür. İdealde aktarılacak geni taşıyan plazmit DNA’dır. Fakat ligasyon sonucu oluşan ürünler arasında başka yapılar da vardır:
  • Birleşmemiş vektör molekülleri
  • Birleşmemiş DNA fragmentleri
  • İçine yeni DNA girmemiş, kendiliğinden resirküle olmuş vektörler
  • Yanlış DNA fragmentleri taşıyan rekombinant DNA molekülleri
  • Rekombinant kolonilerin seçiminde kullanılan ilk yöntem insersiyonel inaktivasyondur.
  • Birçok klonlama vektörü dizayn edilirken bir DNA parçası eklendiğinde vektör üzerindeki genlerden birinin bütünlüğü bozulacak şekilde dizayn edilmiştir.
  • Örneğin pUC8 vektörü amfisilin direnç geni ve LacZ geni içerir. LacZ geni B-galaktosidaz enziminin bir parçasını kodlar. LacZ içine DNA eklendiğinde B-galaktosidaz sentezleyemez.
  • B-galaktosidaz enziminin ortamda olup olmadığını anlamak için X-gal kullanılır. Bu madde B-galaktosidaz tarafından koyu mavi renkli bir ürüne parçalanır.
  • Besi yerine x-gal ve B-galaktosidaz enzimini uyaracak IPTG (isopropil thiogalaktosit) amfisilinle birlikte eklenirse rekombinant olmayan koloniler B-galaktosidaz sentezlediklerinden mavi renk alacaklar, rekombinantlar ise eklenen DNA ile LacZ genleri bozulduğu için B-galaktosidaz üretemez ve beyaz renkli kalır.
Yorum bağlantısı

Yorum yazmak için hesap oluşturmalı veya giriş yapmalısın.

Yorum yapmak için üye olmanız gerekiyor

Hesap oluştur

Hesap oluşturmak ve bize katılmak çok kolay.

Hesap Oluştur

Giriş yap

Zaten bir hesabınız var mı? Buradan giriş yapın.

Giriş Yap
Konu listesine dön

Hakkımızda

Biyoloji Günlüğü ülkemizdeki biyoloji öğrencileri, mezunları ve çalışanları adına kar gütmeyen bir proje olarak 9 senedir faaliyetlerine yılmadan devam etmeye çalışan masum bir projedir. Lütfen art niyetinizi forumdan uzak tutunuz. Bize iletişim formu aracılığıyla ulaşabilirsiniz.

Dilerseniz biyolojigunlugu@gmail.com veya admin@biyolojigunlugu.com adresine mail de gönderebilirsiniz. Bizimle arşivinizi paylaşmak isterseniz wetransfer.com üzerinden biyolojigunlugu.com adresine dosya transferi olarak iletmeniz yeterlidir, sizin adınıza paylaşılacaktır.

Sitemiz bir "Günlük" olarak derleme yayın, yorum, diyalog ve yazılara vermektedir. Güncel biyoloji haberleri ve gelişmelere ek olarak özellikle sosyal medyada gözden kaçan, değerli gördüğümüz tüm içeriğe kaynak ve atıflar dahilinde sitemizde yer vermekteyiz. Bu sitede verilen bilgilerin kullanım sorumluluğu tümüyle kullanıcıya aittir. Sayfalarımızda yer alan her türlü bilgi, görsel ve doküman sadece bilgilendirmek amacıyla verilmiştir.

Biyoloji Günlüğü internet sitesi 5651 Sayılı Kanun’un 2. maddesinin 1. fıkrasının m) bendi ile aynı kanunun 5. maddesi kapsamında Yer Sağlayıcı olarak faaliyet göstermektedir. İçerikler, ön onay olmaksızın tamamen kullanıcılar tarafından oluşturulmaktadır. Yer Sağlayıcı olarak, kullanıcılar tarafından oluşturulan içeriği ya da hukuka aykırı paylaşımı kontrol etmekle ya da araştırmakla yükümlü değildir.

Yer Sağladığı içeriğin 5651 Sayılı Kanun’un 8 ila 9. maddelerine aykırı şekilde; kişilik haklarınızı ihlal ettiğini ya da hukuka aykırı olduğunu düşünüyorsanız mail adreslerimizden iletişime geçerek bildirebilirsiniz. 

Bildirimleriniz dikkatle ve özenle incelenmekte olup kişilik haklarınızın ihlali ya da hukuka aykırılığın tespiti halinde mevzuat kapsamında en kısa sürede işlem yaparak bilgi vereceğiz.

×
×
  • Yeni Oluştur...

Önemli Bilgilendirme

Kullanım Şartları, Gizlilik Politikası, Forum Kuralları sayfalarına göz atınız.

  Kabul Ediyorum